تقنية الاليزا المباشرة Direct ELISA
للكشف المباشر، يتم الكشف عن مستضد مغطى بلوحة بواسطة جسم مضاد تم اقترانه مباشرة بإنزيم، ويكون حفر الاليزا مغطى بالجسم المضاد .
تعد طريقة الكشف هذه خيارًا جيدًا إذا لم تكن هناك مجموعات اليزا متاحة تجاريًا للبروتين المستهدف.
عندما يكون المطلوب الكشف عن المستضد وقياس تركيزه في العينة , ففي هذه الحالة :
يرتبط المستضد في العينة مع الجسم المضاد. يتم غسل الطبق لازالة الاجسام المضادة غير المرتبطة .بعد ذلك تتم إضافة أجسام مضادة أخرى و تكون هذه االجسام المضادة مرتبطة بإنزيم .يتم غسل الطبق أيضا األجسام المضادة غير المرتبطة .ثم تضاف المادة الاساسية للانزيم، ويتم حساب كمية المستضد عن طريق قياس كمية ناتج التفاعل
ايجابيات الاليزا المباشرة
سريع لأنه يتم استخدام جسم مضاد واحد وخطوات أقل. يتم التخلص من التفاعل التبادلي للأجسام المضادة الثانوية.
سلبيات الاليزا المباشرة
قد تتأثر النشاط المناعي للجسم المضاد الأولي سلبًا عن طريق وضع العلامات بالإنزيمات أوغيرها.تصنيف الأجسام المضادة الأولية لكل نظام اليزا محدد يستغرق وقتًا طويلاً ومكلفًا.لا توجد مرونة في عملية وضع علامة للجسم المضاد الأولي من تجربة إلى أخرى.تضخيم الإشارة بالحد الأدنى.
*****
تقنية الاليزا غير المباشرة Indirect ELISAعندما يكون المطلوب الكشف عن المستضد وقياس تركيزه في العينة، ففي هذه الحالة: يُضاف المستضد المخصص لحفر االليزا و يُترك فترة حتى يلتصق. يُضاف السيرم المحتوي على أنواع مختلفة من الجسم المضاد تسمى بالجسم المضاد الاولي يرتبط الجسم المضد في السيرم مع المستضد الموجودة في الطبقيتم غسل الطبق لازالة الجسم المضاد غير المرتبط. يُضاف مستضد آخر مرتبط بإنزيم الجسم المضاد الثاوي وهذا يمكنه الارتباط فقط في حال ارتباط الجسم المضاد الاولي بالعينة الموجودة بالطبق.يتم غسل الطبق لازالة الجسم المضاد الغير المرتبط .تضاف المادة االاساس للإنزيم، ويتم حساب كمية الجسم المضاد عن طريق قياس كمية ناتج التفاعل .
ايجابيات الاليزا غير المباشرة
تتوفر مجموعة متنوعة من الأجسام المضادة الثانوية ذات العلامات التجارية.متعدد الاستخدامات لأن العديد من الأجسام المضادة الأولية يمكن أن تصنع في نوع واحد ويمكن استخدام نفس الجسم المضاد الثانوي المسمى في الكشفيتم الاحتفاظ بأقصى نشاط مناعي للجسم المضاد الأولي لأنه غير موصوف.تزداد الحساسية لأن كل جسم مضاد أولي يحتوي على عدة يمكن ربطها بالجسم المضاد الثانوي المسمى، مما يسمح بتضخيم الإشارة.
سلبيات الاليزا غير المباشرة
قد يحدث تفاعل متصالب مع الجسم المضاد الثانوي ، مما ينتج عنه إشارة غير محددة.مطلوب خطوة حضانة إضافية في الإجراء.
Comments
Post a Comment
اكتب تعليق حول الموضوع