PCR

PCR

هي تقنيه مخبريه تقوم علي اساس تصنيع عده نسخ عديده من قطع الحمض النووي   DNA في المختبر 

     In vitro

مبدا عمله:

يمكن اعتبار تقنيه pcr ترجمه مبسطه لعمليه  استنساخ الحمض النووي DNA  اثناء الانقسام الخلوي

وهدفه : يهدف لتضخيم جزيئات قليله من الحمض النووي DNA بعد استخلاصه من خلايا اوسوائل الجسم وبالتالي الحصول علي كميات كبيره منه فيمكن اجراء التحليل عليه

اهم تطبيقاته :

1- الكشف عن الطفرات الوراثيه.

2- تعيين البصمه الوراثيه.

3- الكشف عن الفيروسات.

4- يساعد في تشخيص بعض الامراض والتي تسببها بكتيريا او فيروسات

5-  يستخدم في الاستنساخ وانتاج خلايا اكثر

6- هو العنصر الاهم في عمليه التجميع الجيني Recombinant في الحمض النووي بحيث يقوم بتكثير الجين المراد ادخاله علي البلازميد او الحمض النووي DNA  المضيف

7- استخدامه في تغيير نهايات الجين لتصبح متوافقه مع انزيمات القطع

Restriction enzyme

8- هو العمليه الاساس في تحديد تتابع القواعد النيتروجينيه في الحمض النووي DNA

(DNA) sequencer

يعتمد pcr علي الوزن الجزئي فتكون القطع الكبيره في بدايه الجل واما الصغيره في نهايه الجل والمتوسطه في وسط الجل

متطلبات هذه التقنيه:

1- عينه DNA

2-two primers

وهي سلسله من القواعد النيتروجينيه يتم اضافتها لبدء عمليه الاستنساخ لتضاعف وهي المكمله للDNA فتستخدم كمعرفه لبدايه الارتباط  

3-انزيم التفاعل Taq polymerase

يساعد في بناء الشريط الجديدمن التضاعف

4-DNA polymerase

يساعد في ارتباط primer مع DNA

5-dNTPs

مجموعه من القواعد النيتروجينيه التي تستخدم لبناء الشريط الجديد

6- محلول منظم( pcr buffer10 x)

يستخدم لتنظيم التفاعل

7-شوارد مناسبه واهمها شارده Mg+2

التي تعتبر عامل متمم cofactor لانزيم البلومريز

8- ماء مقطر

انواعه:

1-ا  pcr العادي يحتاج لوقت كبير وبطي في سرعه قراه النتيجه

2- ا     RT.PCR

Real Time PCR

هذا النوع الحديث يقوم بنفس مبدا الاول ولكن اقل وقت وسرعه قراءه النتيجه

مراحل او خطوات العمل:

1- Denaturation

مرحله التفكيك الحراري بحيث نرفع درجه الحراره الي 94°  وذلك لتفكيك الشكل المزدوج للحمض الاصل 

d.s.DNA --- s.s.DNA

2- primers annealing

مرحله الالتصاق البادئات 

بحيث في هذه المرحله نخفض درجه الحراره الي 55-60° لتقوم primers بالالتصاق بواسطه الروابط الهيدروجينيه  مع الحمض DNA الاصل

3- Extension

مرحله الامتداد بحيث نرجع نرفع درجه الحراره الي 72-75° ليقوم انزيم البلمره بعمله في بناء الحمض النووي الجديد في وجود dNTPs

 وكل هذه المراحل الثلاث تمثل دوره كامله وفيها يصبحDNA مضاعف وتعتمد كميه الحمض الناتجه علي عدد الدورات

بحيث اذا كان 

1(DNA)--- 2( DNA)

في الدوره الاولي

وفي الدوره الثانيه 

2(DNA)---- 4(DNA)

وهكذا...

- كيف نشخص لشخص مصاب لفيروس

اولا ماشي نعمل عزل للحمض النووي للبكتيريا او الفيروس ونعمل له ترحيل 

بعد ذلك ناخذ عينه المريض ونعمل له ترحيل فاذا لهم نفس الترحيل للدنا حق الفيروس نفس الدنا حق المريض معناه ان الشخص مصاب بالفيروس 

واذا لم يحدث تطابق فان الشخص ليس مصاب بالفيروس

ماسم البكتيريا التي نعزل منها الانزيم المستخدم بالتقنيه انزيم Tq polymrase

اسم البكتيريا 

Thermus aquaticus

وهي تتواجد في الينابيع الحاره

لذلك ميزه هذا الانزيم انه لايتاثر بدرجه الحراره العاليه فلا يحدث له تحلل ودرجه الحراره المثلي له 72°