زراعة البول ( Urine Culture )

زراعة البول ( Urine Culture )

اول نوع من الزراعه وهي زراعة البول ..

شروط جمع عينة البول للزراعه :

1- على المريض الامتناع عن تناول المضادات الحيويه لفترة 4-5 ايام قبل اعطاء العينة لتجنب النتائج السلبية الخاطئه .

2- جمع البول في عبوه معقمه ومحكمة الاغلاق .

تنبيه المريض لعدم فتح العبوه لفترة زمنيه طويله وعدم ملامسة الجوانب الداخلية للعبوه وغلاقها مباشرة بعد وضع العينه .

- يتم جمع البول من المريض بعدة طرق اكثرها شيوعا هي ( تقنية البول الوسطى ) لسهولتها ولانها تقلل تلوث العينه بالبكتريا الموجوده ( وتتلخص بطرح الكمية الاولى من البول خارجا ثم وضع الكمية التالية وسط البول MSU في عبوة الجمع وطرح اخر البول )

زراعة البول :

تستخدم لتحديد النوع البكتيري المسبب للالتهاب ... ويفضل قبل البدء بالزراعه الاخذ بالاتي :

1- اعداد الاوساط اللزمه والمناسبه للبكتريا المتوقع وجودها في العينه .

2- توفير جو معقم للقيام بعملية الزراعه .

3- يجب زراعة البول في جو لاهوائي Anaerobic وذلك لوجود الساكن الطبيعي اللاهوائي Anaerobic Normal Flora في الاحليل والمناطق المحيطه به .

الاوساط الزراعيه :

تزرع عينة البول غالبا على نوعين :

1- وسط الدم Blood Agar وهو وسط غني وملائم لنو معظم انواع البكتريا الموجبه والسالبه .

2- اوساط اختياريه مفرقه مثل EMB و MacConkey Agar وهي اوساط ملائمه لنمو البكتريا السالبه لصبغة غرام ةتعطي دلاله لونيه على البكتريا القادره على تخمر اللاكتوز .

طريقة الزراعة بالتخطيط المباشر :

وهذي تعتبر افضل طريقه ... وتتم كالتالي :

1- اخذ العينه المراد زراعتها ونشرها على الطبق على شكل خطوط مستقيمه 3-4 خطوط بواسطة wire loop . 

2- حرق ال wire loop بواسطة اللهب اذا كان العد ليس الهدف , ثم تبريده .

3- فرد او نشر جزء من نهاية الخطوط السابقه بخطوط مقاطعه للخطوط الاولى .

4- حرق ال wire loop مره اخرى وتكرار العمليه .

5- حضن الاطباق على درجة حراره 37 م لمدة 24 ساعه في ظروف هوائيه .

6- مراقبة النمو فان لم يظهر النمو خلال 24 ساعه تترك الاطباق ليوم اخر 48 ساعه وعند بقاء الوضع كماهو في عدم ظهور النمو تسجل النتيجه : 

No Growth After 48 Hours

تهف الطريقه الى : الحصول على مستعمرات منفرده , حيث تعتبر طريقه من طرق التخفيف 

تلوين البكتريا بصبغة غرام وتشخيصها مجهريا :

تهدف طريقة غرام الى :

1- معرفة تفاعل البكتريا مع صبغة غرام 

2- معرفة شكل الخلايا البكتيريه 

3- معرفة ترتيب هذه الخلايا مع بعضها 

طريقة جرام في الصبغ 

1- جهز شريحة زجاجيه نظيفه وضع نقطه من المحلول الملحي Normal Saline على وسط الشريحه 

2- بواسطة ال wire loop خذ كمية قليله جدا من النمو البكتيري وامزجها مع المحلول الملحي على سطح الشريحه 

3- تجفف ال Smear بالهواء ويمرر فوق اللهب 3 مرات للتثبيت 

4- تغمر الشريحه بصبغة جرام Crysal Violet لمدة دقيقه 

5- تغسل الشريحه بماء الحنفيه الهادىء , ثم تغمر بمحلول اليود Iodine لمدة دقيقه 

6- تغسل الشريحه وتغمر في الكحول مع الاسيتون لمدة 10 - 15 ثانية فقط 

7- تغسل الشؤيحه جيدا بالماء الهادىء وتغمر بالصبغه البديله Safranin ولمدة دقيقه 

8- تغسل الشريحه جيدا وتجفف جيدا , ثم تفحص 

النتيجه : 

اذا تقبلت البكتيريا صبغة جرام _ موجبه لصبغة جرام

( لون بنفسجي )

لم تتقبل صبغة جرام _ سالبه لصبغة جرام

( لون احمر )

فيمايلي مخطط توضيحي لتشخيص البكتريا المسببه لالتهاب المسالك البوليه :

( عينة البول )

الزراعه على Blood Agar+ MacC Agar 

1- النمو فقط على وسط Blood Agar 

عند صبغها بصبغة غرام _ بكتريا موجبه لصبغة غرام 

1- كرويه ( Cocci )

2- عصويه ( Bacilli )

وبفحصها ب Catalase  

+ ( Staphylococcus )

- ( Streptococcus )

2- النمو على كلا الوسطين :

عند صبغها بصبغة غرام  بكتريا سالبه لصبغة غرام

1- كرويه مزدوجه 

فحص Oxidase  + 

Neisseria 

Maltose  + N.meningitidis

N. gonorrheae - 

2- بكتريا عصويه 

تخمير اللاكتوز  + 

Enterobacter- E . Coli - Klebsilla - Citrobacter

 - 

Salmonella - Shigella - Proteus - Pseudomonas

صح نسیت اهم ميديا وهي cled agar

وثانیا

لایمکن لneisseria ‎النمو في الماکونکي.