طرق تحضير البيئات المغذية للبكتيريا:

طرق تحضير البيئات المغذية للبكتيريا:

أولاً : تحضير بيئة المرق المغذي Nutrient Broth

1 – ضع 3جم مستخلص لحم + 5جم مسحوق ببتون في وعاء زجاجي نظيف .

2 – أضف لتر ماء مقطر للمكونات السابقة في الوعاء مع خلطها جيدا حتى الإذابة .

3 – أسحب بواسطة ماصة 10مل من البيئة وقدر قيمة الـpH بها 0.

قدر الكمية اللازمة من الحمض أو القلوي اللازمة لضبط الـ pH في 990مل من البيئة ثم أضف الكمية من الحامض أو القلوي اللازمة لضبط الـ pH إلى 7.2 .

4 – صب البيئة في أنابيب أو دوارق مناسبة باستعمال قمع التعبئة .

5 – غطى الأنابيب أو الدوارق بسدادات من القطن أو المعدن أو البلاستيك حسب ما يتوفر لديك بالمعمل .

6 – ضع الأنابيب في الأسبتة السلكية الخاصة بها .

7 – ضع الأسبتة في الأوتوكلاف بعد الـاكد من طريقة إستعماله ثم عقم الأنابيب لمدة 20دقيقة على درجة حرارة 121 5م وضغط 15 رطل/ البوصة المربعة .

8 – بعد إنتهاء المدة المقررة إقفال الأوتوكلاف وأترك الضغط ينخفض إلى الصفر ثم إفتحه وإستخرج محتوياته .

الصفات المزرعية ( طبيعة النمو ) على بيئة المرق المغذي:

     يلاحظ طبيعة النمو على سطح البيئة وعلى المنطقة تحت السطحية وكذلك النمو في قاع البيئة وذلك لتحديد الإحتياجات الأكسوجينية وهي كما يلي :

1 – سطح المزرعة فيما يلي يبين أشكال النمو السطحي على البيئة السائلة .

2 – تحت السطح يمكن وصف تحت السطح البيئة السائلة بأنه عكر أو يكون حبيبي إذا ما شوهدت جزيئات صغيرة عالقة به ، أو طيفى إذا ما شوهدت أجسام عائمة كبيرة الحجم تتحرك تحت السطح ( flocculent ) ، أو صفيحي flaky إذا شوهدت صفائح صغيرة عائمة به .

3 – الرواسب ( قاع الأنبوبة ) إن كمية الرواسب في قاع الأنبوبة تختلف بين غائبة أو غزيرة ولكي توصف هذه الرواسب ترج الأنبوبة بترك الرواسب لتستقر ويمكن وصف الرواسب حبيبية granular  ، طيفية flocculent أو صفيحي flaky أو لزجة Viscid ولإختبار الكثافة ( اللزوجة ) يحرك الراسب بإبرة تلقيح معقمة .

ثانياً : تحضير بيئة الآجار المغذي Nutrient agar :

1 – حضر بيئة المرق المغذي بالطريقة السابقة.

2 – بعد ضبط قيمة الـ pH إلى 7.2 أضف 20جم من مادة الآجار ( مادة صلبة تسال على درجة الغليان ثم تتصلب على درجة 42 5م ) ثم ضع الوعاء على حمام مائي على درجة 100 5م حتى يتم انصهار الآجار.

3 – عبيء البيئة في أنابيب بواسطة قمع التعبئة ( يراعى السرعة حتى لا تتصلب البيئة على القمع وتسده ) كما يراعى ملىء 2/3 الأنبوبة إذا أريد الحصول على آجار عميق . أو 1/3 الأنبوبة إذا أريد الحصول على آجار مائل slanted كما يمكن تعبئتها في دوارق أو زجاجيات أيضاً .

4 – تسد ألنابيب كالمعتاد وتوضع في الأسبتة .

5 – تعقم في الأوتوكلاف كما سبق في تحضير المرق المغذي .

6 – بعد إخراج الأنابيب المعدة لعمل الآجار المائل تمال الأنابيب وتوضع قممها على جزء مرتفع للحصول على السطح المائل ويراعى أن لا تصل البيئة إلى السدادات القطنية وتترك لتتصلب في هذا الوضع .

الصفات المزرعية ( طبيعة النمو ) على بيئة الآجار المغذي المائل :

لاحظ ما يلي كما في الشكل المجاور

1 – كمية النمو فوق الآجار المائل : وهي إما أن تكون خفيفة أو متوسطة أو غزيرة أو لا يوجد نمو على الإطلاق .

2 – لون النمو : يجب ملاحظة الصفات المصاحبة للنمو كاللون إما داخل البيئة نفسها أو على النمو فقط – معظم البكتيريا يظهر نموها باللون الأبيض والبعض الآخر قد يبدى درجات مختلفة من التلوين – بعض البكتيريا تكون صبغات قابلة للذوبان في الماء تنتشر في البيئة . لذلك يجب أن توضع المزرعة أمام ضوء قوي للبحث عن الصبغات المنتشرة في البيئة .

3 – الشفافية : الكائنات التي تنمو بغزارة على الآجار المائل تبدو معتمة عن تلك التي تعطي نمواً خفيفاً ، ودرجة الشفافية يمكن أن توضح كالأتي : معتم – شفاف – شفاف جزئياً .

4 – الشكال المختلفة لقوام النمو موضحة في الشكل المجاور وهي :

النمو الخيطي Filiform يتميز بإنتظام النمو على طول خط التلقيح .

النمو المسنن  Echinulate حواف النمو تظهر بموجات مسننة .

النمو الخرزي Beaded مستعمرات صغيرة منفردة أو شبه متصلة على طول خط التلقيح .

نمو ضئيل Effuse النمو خفيف بشكل نقط صغيرة منتشر بدرجة غير منتظمة .

نمو شجري Arborescent نمو بكتيري ( يشبه جدع الشجرة ) يخرج منه تفرعات تشبه أفرع الأشجار.

نمو جذري Rhizoid النمو البكتيري يشبه تفرعات الجذور النباتية