#الطريقة العملية لتحليل الهيموجلوبين بطريقة درابكن

#كيفية تحضيرW.S) Working solution )

10micron of Drabkon,s Reagent+

90 micron of distal waterD.w

■ مضاعفة الكميه

1ml Drabkon,s Reagent(1000)Micron+9ml Distal water(9000)Micron

يوضع فى عبوه بعيدا عن الضوء ذات لون داكن لانه يتأثر بالضوء وبالتالى يؤثر على دقةالنتائج

1- يتم اضافة (10 ميكرون) من الدم (EDTA+ blood)..ونمسح برفق باقى الدم على التيبس من الخارج بويبس  الى (2.5 مل) من محلول درابكن(W.S) وخلطهم جيدا

2- يتم تحضين العينة فى درجة حرارة الغرفة لمدة (3-5) دقيقة لضمان تحول الهيموجلوبين الى اللون البنى

3- يتم قياس العينة فى جهاز (spectrophotometer)بعد تصفير الحهاز بالمحلول

4- تقاس العينة بالجهاز عند الطول الموجى (540 نانوميتر)

5- يتم حساب العينة من خلال المعادلة التالية

Concentrationof Hb=Absorbance*36.77

اى انة يتم ضرب الرقم الناتج من الجهاز فى (36.77). Factor

6-  كتابة  النتائج

النيل سعيدالنيل

#ماهى مكونات محلول درابكن؟

#محلول درابكن يتكون من مادتين ..

**1- البوتاسيوم سيانيد.

**2- البوتاسيوم فيراسيانيد

. .

The principle of Drabkin's solution:

*This is based on oxidation of Hb and its derivatives except sulfhemoglobin to *form methemoglobin in the presence of alkaline K- ferricyanide.

***The methemoglobin reacts with K-cyanide to form a very stable compound, Cyanometh hemoglobine has maximum absorption at 540

   #بعدقياس الهيموجلوبين والهيماتوكريت. وعد كرات الدم الحمراء

#نطبق المعادلات لاستخراج

Blood Index:.

Mean Corpuscular Volume (MCV) = HCT *10/ RBCs.

Mean Corpuscular Haemoglobin (MCV) = HB*10/ RBCs.

Mean Corpuscular Haemoglobin Concentration = HB*100 / HCT.

..#معلومة  MCHC ممكن يطلع عالى   بسبب أخطاء السحب

mchc = Hb * 100 / hct

وبالتالي أي خطأ يرفع الهيموجلوبين يسبب علو MCHC

كذلك أي خطأ يقلل قيمة الهيماتوكريت برضه يعلي MCHC

### خطأ زيادة الهيموجلوبين

اما تكسير العينه او زياده.   10microبالطريقه المانيوال

النيل سعيدالنيل

###  الهيماتوكريت ممكن يطلع قليل عن طريق الخطأ ؟

#ممكن مثلا يبقى العينة مسحوبة على كمية كبيرة من الايديتا ، والايديتا بتعمل انكماش للخلايا فيقل حجمها وبيالتالي يقل الهيماتوكريت .

#ممكن يحصل هيموليسس وغالبا بيكون بسبب السحب فيقل عدد كرات الدم وبالتالي يقل الهيماتوكريت

استخراج قيمة Hb من قيمة HCt

هناك علاقة رياضية تربط بين قيمة PCV وبين قيمة Hb وهي حسب المعادلة

اما Hb. = PCV ÷ 3

او PCV = Hb. X 3

هل هذه المعادلة صحيحة

  اغلب النتائج في الحالات الطبيعية تكون متقاربة .. لكن في كثير من حالات فقر الدم المتعلق بكبر او صغر حجم كرات الدم الحمراء (مثل: الثلاسيميا Thalassemia او انيميا نقص الحديد Iron deficiency anemia وغيرها ) تختلف القيمتان فقد يكون تركيز ال Hb طبيعيا لكن هناك خلل في حجم كرية الدم نفسها الامر الذي يجعل قيمة الPCV منخفضا والعكس صحيح الأمر الذي يجعل استخدام أو الاعتماد على تلك العلاقة الرياضية غير مبرر

المعادلات هذه لا تطبق الا في حالة كانت الخلايا الدم الحمراء RBCs طبيعية من نوع normochromic normocytic

يعني الMCV و الMCH طبيعيين

وغير ذلك لا تطبق

الحل لايجاد قيمة الHb هو اما بطريقة محلول درابكن Drabkin solution او عن طريق اجهزة الCBC

##

Dr

03:36

#طريقة درابكن

إذاي اظبط فاكتور الهيموجلوبين

قبل مانقول ازاي نقول هو جا منين

اولا جا منين الفاكتور

في طريقين

👈 الأول بمعلومية الثوابت

Hb factor= (64500X250) / (44XdX10X1000) = 36.7

64500= molecular weight of haemoglobin

250= dilution factor

44= extension coefficient

d= light path

10= conversion from g to mg

1000= conversion from mg to g

والفاكتور دا هدخله المعادلة الشهيرة واللي ف الاحتمال التاني دا

👈 التانية بمعلومية استاندرد عياري

ICSH HiCN standard

عادي جدا

معادلة بيير ولامبرت بتقول

Substrate concentration / standard concentration = OD of sample / OD of standard

يبقى

Substrate concentration = OD of sample / OD of standard X standard concentration

خد بالك

Substrate concentration

دا تركيز المادة وليكن الهيموجلوبين وهو النتيجة اللي انا عايزها في العينة المجهولة

standard concentration

دا تركيز المادة بس في محلول معلوم قيمتة والشركة المصنعة معرفاني قيمتة أو بمعنى اخر عينة بس معلوم تركيزها

OD of sample

ودا الامتصاص absorbance أو optical density للعينة في الجهاز وقراءة العينة المجهولة

OD of standard

ودا الامتصاص absorbance أو optical density لاستاندرد في  الجهاز وقراءة المحلول العياري

يبقى حساب اي فاكتور كالآتي ودا اللي الجهاز بيعمله مع كل التحاليل

Factor = standard concentration / OD of standard

فمثلا

standard concentration = 15

OD of standard = 0.4078

يبقى الفاكتور 36.7

واللي ف كلتا الحالتين دي هتبقى معادلة الجهاز

Hemoglobin concentration = abs of sample X 36.7

ولكن الاكثر واقعية هي الأولى

ثانيا ازاي اظبط الفاكتور على الجهاز بمعلومية كنترول او استاندرد

👈 هنفترض ان الجهاز حافظ فاكتور وليكن 36

👈 هنعمل عينة او اتنين او اكتر معلوم تركيزها وليكن 10 جرام

👈 لو طلعت النتيجة 10 جرام يبقى تمام الفاكتور مناسب

👈 لو طلعت مختلفة وليكن 8 جرام

👈 هنعمل مقص يعني

8    👉👉👉  36

10  👉👉👉 ?

10 X 36 / 8 = 45

👈 هندخل على اعدادات الجهاز ونغير الفاكتور للرقم الجديد

👈 نعمل الحوار دا باستمرار لضمان دقة رقم الهيموجلوبين

ودمتم بخير

النيل سعيدالنيل

Dr

03:37

#الكنترول عينه معلومة التركيز وليكن 10

ادخل العينه على الجهاز لو نفس النتيجه يبقى فاكتور  الجهاز عندى مضبوط

لو نتيجه اقل او اكتر

اعدل فاكتور الجهاز

لو مثلا فاكتور الجهاز كان 36.5 والنتيجه طالعه 8

يبقى اعمل مقص

8__36.5

10_؟

ونعدل الفاكتور  للفاكتور الجديد...ونشتغل

Dr

14 April 2023

ع

02:50

علم التحاليل المخبرية