استكمالا لكلامنا عن العينات فمن اهم الحاجات اللى لازم يعرفها اخصائي التحاليل الطبيه هى اساسيات حفظ العينات بطريقه صحيحه حتى تكون النتائج دقيقه و موثوق فيها
و حنزل هنا بوست كنت نزلته من فتره عن نفس الموضوع بحيث نبقي متابعين الشرح بالترتيب
===============
فى البوست ده حنتكلم باختصار عن اساسيات حفظ العينات بشكل عام و نخصص الحديث لبعض العينات الشهيره
**** (1) لابد من فصل السيرم او البلازما من العينه بشكل سريع (اغلب المراجع بتقول within 2 hours مع ملاحظه ان فى عينات السكر لازم الفصل فى وقت اقل)
**** (2) **** المتعارف عليه ان درجه حراره الحفظ (للسيرم او البلازما) كلما كانت اقل كلما طالت مده الحفظ
**** (3) **** اى عينه تم تجميدها فى الفريزر لابد من تركها تعود لدرجه حراره الغرفه و تقلب جيدا قبل الشغل
**** (4) **** لا يجوز ابد حفظ عينات ال whole blood زى عينات صوره الدم فى الفريزر (اى لا يجب تجميدها)
**** (5) **** عينات البيليروبن يجب حفظها بعيدا عن مصادر الضوء حيث ان مستوى الصفراء ممكن يقل لاكثر من 30% عند العرض المباشر للضوء
**** (6) **** عينه البول: لازم تتفحص خلال ساعه من اخذ العينه .... طيب لو مش حتقدر يبقي فى خلال ساعه بالكتير لازم تحفظ العينه فى الثلاجه لمده لا تزيد عن 8 ساعات للحصول على نتيجه موثوق فى دقتها مع ملاحظه ان حيترسب amorphous urates و لازم ترجع لدرجه حراره الغرفه قبل ما تشتغلها بعد الحفظ (و ان كان البعض يطل مده الحفظ الى 24 ساعه كما فى المزارع)
**** (7) **** عينات البراز: لابد من فحصها خلال ساعه من اخذ العينه (لضمان رؤيه الاطوار النشطه trophozoites او ال larvae ان وجدت) و اذا تعذر ذلك فلابد من تحضير العينه بمحلول الملح (طريقه ال sedimentation) و حفظها فى الثلاجه لمده اقصاها 24 ساعه و يمكن اضافه (10% formalin) للحفاظ على شكل البويضات مع ملاحظه انك كده غالبا فقدت فرصه انك تشوف الاطوار النشطه فى العينه
**** (8) **** الوضع المثالى هو ان تشتغل صوره الدم (CBC) فى خلال 4 ساعات من السحب لكن من الممكن الاحتفاظ بالعينه فى الثلاجه (ليس الفريزر) لمده اقصاها 24 ساعه بدون تغيير مؤثر على النتيجه (و يفضل فرد فيلم من البدايه قبل الحفظ لضمان افضل نتيجه ممكنه)
**** (9) **** بالنسبه لعينات السيوله زى البروثرومبين (PT) فالوضع المثالى هو انك تشتغلها فى خلال 4 ساعات من السحب (بعد فصل البلازما طبعا) لكن طبقا ل (Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI) guidelines) فالعينه تظل ثابته لمده 24 ساعه من الحفظ فى درجه حراره (18° C to 24° C) مع مراعاه تغطيه العينه جيدا ..... و لاحظ ان حفظ العينه فى الثلاجه (at 1° C to 6° C) نفس المده ربما ادى الى نتيجه غير صحيحه (shortened PT results) لان التبريد يحدث تنشيط للعامل السابع
و طبعا يمكن اطاله مده الحفظ اكثر من كده (للاغراض البحثيه) حوالى اسبوعين اذا تم الحفظ عند درجه حراره (-20) او لمده 6 شهور اذا تم الحفظ عند درجه حراره (-70)
**** (10) **** بالنسبه لعينه ال (PTT) فالوضع المثالى هو انك تشتغلها فى خلال ساعتين من السحب او خلال 4 ساعات اذا حفظتها عند درجه حراره (4°C) و لكن الحفظ لمده اطول يعطى نتائج خاطئه (falsely elevated PTT results) لتأثر العوامل (Factors VIII and V)
**** (11) **** عينات المزارع الوضع المثالي لها هو انك تشتغل خلال ساعتين فقط من اخذ العينات ............. لكن اذا كان لابد من تاخير الشغل فيمكن حفظ العينات الاتيه فقط (Urine, Wound swabs, Throat swabs, Eye discharge, Ear discharge) فى الثلاجه (at 2-8 ° C) لمده اقصاها 24 ساعه
و لابد من مراعاه الاتى: عينات البراز لا يفضل حفظها فى الثلاجه حيث ان السالمونيلا و الشيجلا تتاثر بتغير ال pH المصاحب لانخفاض الحراره و اذا كان لابد من انتظار مده قبل الشغل فلابد من حفظها فى ميديا خاصه (Cary-Blair transport medium ) لمده لا تتجاوز 12 ساعه
لاحظ ايضا انه لا يجوز حفظ العينات الاتيه (Sputum, Urethral & Vaginal samples, CSF) فى الثلاجه ابدا و لابد من زراعتها مباشره
**** (12) **** فى عينات مينفعش يتأجل شغلها زى عد الخلايا الشبكيه (خلال 6 ساعات) زى سرعه الترسيب (خلال 4 ساعات) زى السائل المنوى (خلال ساعه واحده)
**** (13) **** عينات ال PCR: تسحب العينه على ايديتا او تسحب سيرم (حسب نوع التحليل المطلوب) و لابد من فصل البلازما او السيرم عن الدم خلال مده لا تزيد عن 6 ساعات ثم تحفظ فى الثلاجه (4°C) و لا تتاثر العينات لمده 7 ايام تقريبا من حفظها فى الثلاجه و يمكن تجميد العينه اذا احتجت فتره حفظ اطول
طيب ايه العمل فى اى تحليل اخر
اولا اذا كان التحليل بيتعمل عندك يبقي اكيد عندك ال pamphlet الخاص بالكيت و لازم يكون كاتب العينه بتسسحب على ايه و طريقه حفظها و اقصي مده ممكن تعمل العينه فيها (و اكيد كأخصائي
تحاليل طبيه لا يمكن تشت
بحر
19:10
غل بدون pamphlet )
اما لو كنت حترسل التحليل لاب تو لاب يبقي بكل بساطه لو عندك عينه مش عارف تتصرف فى شروط حفظها لازم تتصل بالمعمل اللى حتدى له العينه و تسأله مباشره علي ظروف الحفظ لحد ما تصله العينه لانه حيقولهالك من واقع ال pamphlet الخاص بالكيت بتاعتها عنده و بكده تاخد معلومه صحيحه و دقيقه ...،
بحر
19:17
من الحاجات المهمه اللى لازم يعرفها و يفهمها كويس اخصائي التحاليل الطبيه هى موانع التجلط المستخدمه معمليا و كيفيه استخدامها و ميكانيكيه عملها فى منع التجلط
مبدئيا الفرق بين سحب العينه سيرم او بلازما هو انك لو سحبت العينه على انبوبه فاضيه (plain tube) و تركت الدم فى الحضانه لمده تقريبا من ثلث الى نصف ساعه ثم فصلت العينه فى السنترفيوج تكون قد حصلت على السيرم (و هو خالى من الفيبرينوجين بالتاكيد لانه استخدم فى تكوين الجلطه) اما اذا سحبت العينه على اى مانع تجلط ثم فصلتها تحصل على البلازما (و لذلك فدائما كلمه بلازما ترتبط بنوع مانع التجلط المستخدم)
ما هى ميكانيكيه تجلط الدم؟
باختصار القصه كلها تدور حول تنشيط العامل العاشر (Factor X) و اللى بدور بيحول البروثرومبين الى ثرومبين اللى بدوره بيحول الفيبرينوجين الى فيبرين و دى بدايه تكوين الجلطه (التفاعلات دى بتستخدم الكالسيوم كمحفز للتفاعل)
ما هى انواع موانع التجلط المستخدمه معمليا؟؟
عندى اربع موانع تجلط هى الاشهر استخداما فى المعامل
**** الايديتا (EDTA)
==============
و هى اختصار ل ( (Ethylene diamine tetraacetic acid
الايديتا موجوده على هيئه ملح صوديوم او ملح بوتاسيوم
اما بودر و كانت تحضر بنسبه 6% (اى 6 جرام ايديتا على 100 مل ماء مقطر) و يستخدم 50 ميكرون ايديتا سائله لكل 1 مل دم لمنع تجلطه او انها تباع حاليا متحضره جاهزه
و تعمل الايديتا على منع التجلط بتكوين متراكب مع الكالسيوم اللازم لاتمام عمليه التجلط فيتم منع التجلط بشكل نهائي و تستخدم الايديتا فى بشكل اساسي فى التحاليل التى تتطلب الشغل على الدم ككل (whole blood) كعينات صوره الدم و فصائل الدم
من مميزات الايديتا انها تعمل على حفظ الخلايا بحاله جيده و تمنع تجمع الصفائح مما يسهل عدها فى صوره الدم
لاحظ الاتى :::::::::: تحاليل السيوله كالبروثرومبين لا يمكن اجرائها من عينه مسحوبه على مانع التجلط الايديتا و ذلك لعدم وجود الكالسيوم فى العينه مما يمنع اتمام عمليه التجلط
كذلك تحاليل الصوديوم و البوتاسيوم لاحتواء الايديتا على هذه الاملاح و ايضا تحاليل العناضر مثل الكالسيوم و المغانسيوم لانها تتفاعل مع الايديتا مكونه متراكب
هذا بالاضافه الى انه فى بعض انواع كيتس الانزيمات لا يفضل استخدام عينات الايديتا لانها تقلل من نشاط الانزيم خيث انها تكون متراكب مع العناصر التى تعمل كعامل مساعد للانزيم فتمنعها من تنشيطه لذلك يجب التأكد من بامفلت الشغل اذا كانت العينه تصحل كبلازما ايديتا لتحليل ما ام لا
**** سترات الصوديوم (Sodium citrate)
==========================
يكون على شكل سائل جاهز بالمعمل و محضر بنسبه 3.8% و يقوم ايضا بمنع التجلط عن طريق تكوين متراكب مع الكاسيوم لكن بشكل اضعف من الايديتا
&&&&& و الاستخدام الرئيسي لسترات الصوديوم فى المعمل هو تحليل سرعه الترسيب حيث تكون نسبه الدم الى مانع التجلط هى 1:4 (مثلا 400 ميكرون سترات +1600 ميكرون دم)
سؤال؟؟؟ ليه النسبه دى بالذات ؟؟؟؟؟ ......... الفكره هنا اننا عملنا تخفيف للدم بحيث ال HCT ميعديش 35% و ده الرقم المناسب لتسهيل تكوين الروليكس ثم ترسيب كرات الدم فى الانابيب الضيقه زى انبوبه ال (Westergren)
سؤال؟؟؟ هل ممكن استخدام الايديتا فى تحليل سرعه الترسيب؟؟؟ .......... بالفعل يمكن استخدام الايديتا السائله فى تحليل سرعه الترسيب بنسبه الدم الى مانع التجلط هى 1:4 و تعطى نفس النتيجه
&&&&& كذلك تستخدم فى اختبارات التجلط مثل تحليل ال PT , PTT حيث تكون نسبه الدم الى مانع التجلط هى 1:9 (مثلا 200 ميكرون سترات +1800 ميكرون دم)
سؤال؟؟؟ طالما سترات الصوديوم بتمسك فى الكالسيوم و انا محتاج الكالسيوم فى اتمام تكوين الجلطه فازى بستخدمها فى اختبارات التجلط؟؟؟؟؟
* زى ما قولنا ان تكوين المتراكب بين السترات و الكالسيوم بيكون ضعيف و كمان بيكون عكسي (اى يمكن عكس هذا التأثير باضافه كالسيوم للعينه) و هذا ما يحدث فعلا فى تحاليل ال PT , PTT حيث ان ريئجنت ال PT محتوى على الكالسيوم و كذلك اثناء تحليل ال PTT نضيف الى التفاعل ماده الكالسيوم كلوريد
هنا بقه حنتكلم على مشكله فنيه ناخد بالنا منها كويس
فى مرضي ال (polycythemia) بيكون حجم كرات الدم كبير (يعنى الهيماتوكريت عالى) يعنى كميه البلازما اقل من الطبيعي و بالتالي كميه مانع التجلط اللى انا وضعتها فى الانبوبه مش حتستخدم كلها و حيتبقي منها جزء ......... فبالتالي لما ابدء التحليل بتاعى و اضع الرئيجنت (المحتوى على كالسيوم) سيقوم مانع التجلط المتبقي بالتفاعل معه و منعه من دخول تفاعل تكون الجلطه و بالتالي احصل على زمن بروثرومبين اعلى (كخطأ معملى) من االى مفروض يكون (prolongation of the PT)
طيب و الحل ايه فى المشكله دى؟؟؟؟
الحل انى احسب الكميه المناسبه من مانع التجلط للحاله اللى معايا بالمعادله الاتيه
C = (1.85 x 10^-3) (100 - H) V
C:
كميه مانع التجلط
بحر
19:17
المطلوبه
H: هيماتوكريت المريض
V: حجم الدم المطلوب سحبه
مثال لو عاوز اسحب 2 مل دم لمريض هيماتوكريته 65%
باستخدام المعادله دى ال (C) حتطلع 130 ميكروليتر و بكده يبقي حجهز انبوبه فيها 130 ميكرو سترات و اكملها بالدم لحد 2 مل عشان النتيجه تطلع معايا مظبوطه
ملحوظه ممكن استخدام نفس المعادله فى حالات الانيميا الشديده (هيماتوكريت اقل من 20%) لحساب نسبه مانع التجلط الملائمه لتفادى ايضا خطأ النتيجه
**** فلوريد الصوديوم (Sodium fluoride)
===========================
فلوريد الصوديوم مانع تجلط ضعيف يكون متراكب مع الكالسيوم لكن اهم مميزاته انه يمنع عمليه تكسير الجلوكوز بواسطه كرات الدم الحمراء (glycolysis) ذلك لانه يمنع عمل انزيم الاينولاز (enolase) المستخدم فى تكسير الجلوكوز
لذلك فان الاستخدام الاساسى لفلوريد الصوديوم فى المعمل هو خفظ عينات السكر اذا كان شغلها سيتأخر و لم نستطيع فصل العينه عن كرات الدم
و لانه مانع تجلط ضعيف فاعلب الانابيب الجاهزه تضيف ماده اوكسالات البوتاسيوم الى فلوريد الصوديم لزياده القدره على منع التجلط
لاحظ ان فلوريد الصوديوم يذوب بصعوبه فلابد من تقليب العينه جيدا جدا كذلك يجب التعامل معه بحذر حيث انه ماده سامه جدااااا
**** الهيبارين (Heparin)
====================
الهيبارين هو مانع تجلط طبيعى موجود فى الجسم و يعمل على الحفاظ على الدم فى صوره سائله و يمنع تجلطه بمنع عوامل التجلط و ذلك عن طريق تنشيط ال (anti-thrombin III)
و يباع الهيبارين فى الصيدليات و استخدامه كعامل تجلط فى المعامل قليل و ربما التحليل الوحيد اللى لازم سحبه على هيبارين هو تحليل غازات الدم حيث ان اى ملح من المستخدم كمانع تجلط سيؤدى الى تغير ال pH فى العينه و يعطى نتائج خاطئه
هناك استخدام اضافى للهيبارين و هو سحب عينه لتحليل البوتاسيوم فى مريض (thrombocytosis) حيث ان العينه السيرم فى هذه الحاله و نتيجه للجلطه اللى حتتكون حيخرج بوتاسيوم من الصفائح اللى اتنشطت بشكل سيؤدى لارتفاع خاطئ بالنتيجه لذلك يعاد السحب على هيبارين و اجراء التحليل
و لاحظ انه لا يفضل استخدام العينه المسحوبه على هيبارين فى تحليل صوره الدم حيث انه يمكن ان يسبب (platelets aggregation and leukocyte clumping) و كذلك يؤدى الى خلفيه زرقاء فى فيلم الدم
د/خالد مجدى👉🏾منقولة
بحر
18 November 2018
ع
18:50
علم التحاليل المخبرية
Comments
Post a Comment
اكتب تعليق حول الموضوع